Приложение к Приказу от 22.04.2011 г № 810
Специфическая лабораторная диагностика крымской геморрагической лихорадки отбор проб и транспортировка биологического материала от больных людей (трупов)
Лабораторная диагностика Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) проводится молекулярно-биологическими, серологическими и вирусологическими методами.
Вирус КГЛ и его антиген обнаруживаются в крови больного до 5 - 7-го дня, иногда до 10-го дня болезни. Специфические антитела - иммуноглобулины класса М к вирусу КГЛ начинают выявляться у больного с 7 - 10-го дня болезни.
Соответственно забор материала для лабораторного подтверждения Крымской геморрагической лихорадки производится:
- для обнаружения методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса КГЛ и антигена вируса КГЛ - до 5 - 7-го дня болезни. Материал доставляется в лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора (Волгоград, ул. Голубинская, 7);
- для определения уровня антител класса М и G:
первый забор - на 5 - 7-й день болезни,
второй забор - на 10 - 14-е сутки болезни.
Материал доставляется в вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области" (Волгоград, ул. Ангарская, д. 13).
Организация отбора проб и транспортировка биологического материала от людей (трупов) для лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) осуществляется в соответствии с требованиями Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)" и Санитарных правил СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности (утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28 августа 1995 г. N 14)".
Отбор проб от больных и подозрительных на заражение вирусом КГЛ осуществляет медицинский персонал с соблюдением правил противоэпидемического режима.
Необходимо использование защитного костюма, перчаток, маски и очков (щитков).
Каждую пробирку маркируют, и оформляют направление с указанием фамилии, имени, отчества больного, возраста, даты начала заболевания, вида материала, времени и даты его забора, Ф.И.О. врача, контактного телефона, и помещают вместе с направлением в первичную герметичную емкость для транспортировки.
Материалом для исследования служат:
- кровь,
- секционный материал: печень, легкие, селезенка, почки, мозг (головной и спинной).
ЗАБОР МАТЕРИАЛА
Забор крови на обнаружение РНК вируса КГЛ методом ПЦР производится натощак из локтевой вены в объеме 4,5 мл одноразовой иглой (диаметр 0,8 - 1,1 мм) в одноразовый шприц или специальную вакуумную систему типа "Venoject" (с ЭДТА), "Vacuettr" (сиреневые крышки - 6% ЭДТА).
Взятую в шприц кровь аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта используется 3,8-процентный раствор цитрата Nа или 6-процентный раствор ЭДТА. Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! Соотношение крови и антикоагулянта составляет при использовании 6-процентного раствора ЭДТА 1:20 и при 3,8-процентного раствора цитрата Nа - 1:9 (на 4,5 мл крови используется 0,5 мл 3,8-процентного цитрата Nа).
Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз (8 - 10 раз) для перемешивания с антикоагулянтом.
Образцы цельной крови до транспортировки в лабораторию могут храниться при температуре 2 - 8 °С в течение 6 часов с момента взятия материала.
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!
Образцы (кровь, биоптаты и др.) должны быть доставлены в лабораторию для проведения ПЦР в день взятия материала.
Забор крови для серологической диагностики отбирают из локтевой вены в стерильную пробирку в количестве 5 - 10 мл, соблюдая правила асептики. Для предотвращения гемолиза сыворотку следует отделить от сгустка. Для этого пробирку с кровью оставляют при комнатной температуре в наклонном положении до образования сгустка, сгусток крови обводят стеклянной палочкой (индивидуальной для каждой пробирки) и помещают в холодильник при температуре +4 °С на 10 часов. Полученную сыворотку отсасывают пипеткой с резиновой грушей в пластиковую одноразовую пробирку, герметично закрывают и направляют в лабораторию для исследования на наличие специфических антител.
Допустимо сыворотку крови хранить в стерильных пробирках при температуре +4 °С в течение 5 дней.
Вскрытие умерших с подозрением на КГЛ производится патологоанатомом или судмедэкспертом в присутствии специалиста по этим инфекциям (эпидемиолог и инфекционист).
Отбор секционного материала производится из глубины внутренних органов (сердце, печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг), стерильно вырезают кусочки ткани размерами 2 - 3 см. Стерильной пастеровской пипеткой с резиновой грушей забирают 8 - 10 мл крови из сердца. Следует отбирать материал из нескольких участков, подвергшихся изменениям, и из участка рядом расположенной ткани, которая выглядит неизмененной. При наличии распада ткани основное внимание обращают на пограничную зону. Отбор секционного материала необходимо производить как можно быстрее после смерти больного (не более 20 часов нахождения при комнатной температуре).
Для проведения исследования на обнаружение в секционном материале РНК вируса КГЛ методом ПЦР готовят микробиоптат (пунктат)/микроаутоптат, который помещают в микропробирки с закручивающимися крышками или пробирки объемом 1,5 мл с защелкой и опускают в емкость для транспортировки.
ТРАНСПОРТИРОВКА МАТЕРИАЛА
Перед транспортировкой в лаборатории материал, помещенный в первичную герметично закрывающуюся тару, помещают во вторичную тару, представляющую собой металлический или пластиковый пенал.
Транспортировка материала осуществляется обязательно в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом.
Запрещается:
1.Использовать гепарин в качестве антикоагулянта.
2.Проводить забор крови для ПЦР в многоразовые стеклянные пробирки.
3.Замораживать образцы цельной крови.
4.Центрифугировать.
5.Производить встряхивание пробирок с кровью, сывороткой.
6.Пипетировать ртом.
7.Использовать стеклянные пробирки с ватно-марлевой пробкой для транспортировки материала.
Пробы с клиническим материалом с целью подтверждения диагноза КГЛ методом ПЦР передаются в лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора после согласования со специалистами Комитета по здравоохранению Администрации Волгоградской области.
Доставка проб материала на исследование в лабораторию производится:
- понедельник - пятница - с 9.00 до 17.00;
- выходные дни - по согласованию с отделом эпидемиологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора Антоновым Валерием Алексеевичем (телефон 8-927-516-50-83, 32-33-24) или с заместителем директора по науке Липницким Анатолием Васильевичем (телефон 37-33-65).
Пробы с клиническим материалом с целью подтверждения диагноза КГЛ серологическим методом передаются в вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области" в рабочие дни с 9.00 до 16.00.
Формы направления в лаборатории на исследования
для установления диагноза КГЛ
(Методические рекомендации от 26.02.2009 N 3.1.3.2488-09
"Организация и проведение профилактических
и противоэпидемических мероприятий против Крымской
геморрагической лихорадки")
Направление N 1
(обязательное)
НАПРАВЛЕНИЕ В вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области" Направляется сыворотка (кровь) для исследования на антитела против вируса КГЛ Ф.И.О. ____________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ Возраст ___________________________________________________________________ Домашний адрес ____________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ Место работы (учебы) ______________________________________________________ Дата заболевания __________________________________________________________ Дата взятия крови _________________________________________________________ Диагноз ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ Наименование направившего учреждения ______________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ Ф.И.О. врача, контактный телефон __________________________________________ ___________________________________________________________________________ Дата отправления материала ________________________________________________ Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________
Направление N 2
(обязательное)
НАПРАВЛЕНИЕ
на исследование секционного материала
В лабораторию _____________________________________________________________
(наименование учреждения)
на наличие РНК вируса КГЛ, антител к вирусу КГЛ класса М, G (нужное
подчеркнуть)
Фамилия _________________________________________,
Имя _____________________________________________
Отчество ________________________________________,
Возраст _________________________________________
Место жительства __________________________________________________________
___________________________________________________________________________
(область, город, район, населенный пункт)
Место работы (учебы) ______________________________________________________
Номер истории болезни ________________, Дата заболевания __________________
Дата смерти _______________________________________________________________
Клинический диагноз _______________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Патологоанатомический диагноз _____________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Вид материала _____________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Дата и время отбора материала _____________________________________________
Дата и время отправки материала ___________________________________________
Дополнительные сведения ___________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. патологоанатома (судмедэксперта), направившего материал для
исследования ______________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. эпидемиолога (инфекциониста), присутствовавшего при вскрытии _______
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. лица, доставившего материал в лабораторию __________________________
___________________________________________________________________________
Дата и время доставки материала в
лабораторию _______________________________________________________________Направление N 3
(обязательное)
НАПРАВЛЕНИЕ
крови на выделение вируса КГЛ
В вирусологическую лабораторию ____________________________________________
___________________________________________________________________________
Направляется кровь на выделение вируса КГЛ
Ф.И.О. ____________________________________________________________________
Возраст ___________________________________________________________________
Домашний адрес ____________________________________________________________
Место работы (учебы) ______________________________________________________
Дата заболевания __________________________________________________________
Дата взятия крови _________________________________________________________
Диагноз ___________________________________________________________________
Наименование направившего учреждения ______________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, контактный телефон __________________________________________
___________________________________________________________________________
Дата отправления материала ________________________________________________
Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________Направление N 4
(обязательное)
НАПРАВЛЕНИЕ
сыворотки крови для исследования на антитела против вируса ККГЛ
В лабораторию в лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ
Роспотребнадзора
Направляется сыворотка крови, кровь для обнаружения РНК вируса КГЛ (нужное
подчеркнуть)
Ф.И.О. ____________________________________________________________________
Возраст ___________________________________________________________________
Домашний адрес: ___________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Место работы (учебы) ______________________________________________________
Дата заболевания __________________________________________________________
Дата взятия крови _________________________________________________________
Диагноз ___________________________________________________________________
Наименование направившего учреждения ______________________________________
Ф.И.О. врача ______________________________________________________________
Дата отправления материала ________________________________________________
Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________