Приложение к Приказу от 08.04.2008 г № 605
Специфическая лабораторная диагностика крымской геморрагической лихорадки
Отбор проб и транспортировка биологического материала
от людей (трупов)
Лабораторная диагностика Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) проводится молекулярно-биологическими, серологическими и вирусологическими методами.
Вирус КГЛ и его антиген обнаруживаются в крови больного до 7 - 10-го, иногда до 14-го дня болезни. Специфические антитела - иммуноглобулины класса М к вирусу КГЛ начинают выявляться у больного с 7 - 10-го дня болезни.
Соответственно, забор материала для лабораторного подтверждения Крымской геморрагической лихорадки производится:
- для обнаружения методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса КГЛ и антигена вируса КГЛ - до 10-го дня болезни. Материал доставляется в лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора (Волгоград, ул. Голубинская, 7);
- для определения уровня антител и нарастания уровня антител:
первый забор - при подозрении на КГЛ;
второй забор - на 10-е сутки болезни;
третий забор - на 17 - 20-й день болезни (при необходимости). Материал доставляется в вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области" (Волгоград, ул. Ангарская, д. 13).
Организация отбора проб и транспортировка биологического материала от людей (трупов) для лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) осуществляется в соответствии с требованиями Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)" и Санитарных правил СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности" (утв. Постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28 августа 1995 г. N 14).
Отбор проб от больных и подозрительных на заражение вирусом КГЛ осуществляет медицинский персонал с соблюдением правил противоэпидемического режима. Необходимо использование защитного костюма, перчаток, маски и очков (щитков).
Каждую пробирку маркируют, и оформляют направление с указанием фамилии, имени, отчества больного, возраста, даты начала заболевания, вида материала и времени и даты его забора и помещают вместе с направлением в первичную герметичную емкость для транспортировки.
Материалом для исследования служит:
- кровь;
- секционный материал: печень, легкие, селезенка, почки, мозг (головной и спинной).
ЗАБОР МАТЕРИАЛА
Забор крови на обнаружение РНК вируса КГЛ методом ПЦР производится натощак из локтевой вены в объеме 4,5 мл одноразовой иглой (диаметр 0,8 - 1,1 мм) в одноразовый шприц или специальную вакуумную систему типа "Venoject" (с ЭДТА), "Vacuettr" (сиреневые крышки - 6% ЭДТА).
Взятую в шприц кровь аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта используется 3,8-процентный раствор цитрата Na или 6-процентный раствор ЭДТА. Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! Соотношение крови и антикоагулянта составляет при использовании 6-процентного раствора ЭДТА 1:20 и при 3,8-процентного раствора цитрата Na - 1:9), т.е. на 4,5 мл крови используется 0,5 мл антикоагулянта.
Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз (8 - 10 раз) для перемешивания с антикоагулянтом.
Образцы цельной крови до транспортировки в лабораторию могут храниться при температуре 2 - 8 °С в течение 6 часов с момента взятия материала.
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!
Образцы (кровь, биоптаты и др.) должны быть доставлены в лабораторию для проведения ПЦР в день взятия материала.
Забор крови для серологической диагностики отбирают из локтевой вены в стерильную пробирку в количестве 5 - 10 мл, соблюдая правила асептики. Для предотвращения гемолиза сыворотку следует отделить от сгустка. Для этого пробирку с кровью оставляют при комнатной температуре в наклонном положении до образования сгустка, сгусток крови обводят стеклянной палочкой и помещают в холодильник при температуре +4 °С на 10 часов. Полученную сыворотку отсасывают пипеткой с резиновой грушей в пластиковую одноразовую пробирку, герметично закрывают и направляют в лабораторию для исследования на наличие специфических антител.
Допустимо сыворотку крови хранить в стерильных пробирках при температуре +4 °С в течение 5 дней.
Вскрытие умерших от КГЛ, а также подозрительных на данную инфекцию, производится патологоанатомом или судмедэкспертом в присутствии специалиста по этим инфекциям (эпидемиолог и инфекционист).
Отбор секционного материала производится из глубины внутренних органов (сердце, печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг), стерильно вырезают кусочки ткани размером 2 - 3 см. Стерильной пастеровской пипеткой с резиновой грушей забирают 8 - 10 мл крови из сердца. Следует отбирать материал из нескольких участков, подвергшихся изменениям, и из участка рядом расположенной ткани, которая выглядит неизмененной. При наличии распада ткани основное внимание обращают на пограничную зону. Отбор секционного материала необходимо производить как можно быстрее после смерти больного (не более 20 часов нахождения при комнатной температуре).
Для проведения исследования на обнаружение в секционном материале РНК вируса КГЛ методом ПЦР готовят микробиоптат (пунктат)/микроаутоптат, который помещают в микропробирки с закручивающимися крышками или пробирки объемом 1,5 мл с защелкой и опускают в емкость для транспортировки.
ТРАНСПОРТИРОВКА МАТЕРИАЛА
Перед транспортировкой в лаборатории материал, помещенный в первичную герметично закрывающуюся тару, помещают во вторичную тару, представляющую собой металлический или пластиковый пенал.
Транспортировка материала осуществляется обязательно в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом.
Запрещается:
1.Использовать гепарин в качестве антикоагулянта.
2.Проводить забор крови для ПЦР в многоразовые стеклянные пробирки.
3.Замораживать образцы цельной крови.
4.Центрифугировать.
5.Производить встряхивание пробирок с кровью, сывороткой.
6.Пипетировать ртом.
7.Использовать стеклянные пробирки с ватно-марлевой пробкой для транспортировки материала.
Пробы с клиническим материалом с целью подтверждения диагноза КГЛ методом ПЦР передаются в лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора после согласования со специалистами Комитета по здравоохранению Администрации Волгоградской области.
Доставка проб материала на исследование в лабораторию производится:
- понедельник - пятница - с 9.00 до 17.00;
- выходные дни - по согласованию со старшим научным сотрудником ФГУЗ Волгоградский НИПЧИ Роспотребнадзора Антоновым Валерием Алексеевичем (телефон 32-33-24) или с заместителем директора по науке Липницким Анатолием Васильевичем (телефон 37-33-65).
Пробы с клиническим материалом с целью подтверждения диагноза КГЛ серологическим методом передаются в вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Волгоградской области" в рабочие дни с 9.00 до 16.00.
Формы направления в лаборатории на исследования
для установления диагноза КГЛ
(Методические рекомендации "Организация и проведение
мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки
на территории природных очагов России"
Минздрав России, 2001)
НАПРАВЛЕНИЕ
В вирусологическую лабораторию ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в
Волгоградской области"
Направляется сыворотка (кровь) для исследования на антитела против вируса
КГЛ-Конго
Ф.И.О. ____________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Возраст ___________________________________________________________________
Пол _______________________________________________________________________
Домашний
адрес _____________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Место работы (учебы)
___________________________________________________________________________
Дата заболевания __________________________________________________________
Дата взятия крови _________________________________________________________
Диагноз ___________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Наименование направившего учреждения ______________________________________
Ф.И.О. врача ______________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Дата отправления материала ________________________________________________
Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________
НАПРАВЛЕНИЕ
на исследование секционного материала
В лабораторию _____________________________________________________________
(наименование учреждения)
Фамилия ___________________________________________________________________
Имя _______________________________________________________________________
Отчество __________________________________________________________________
Возраст ___________________________________________________________________
Место жительства __________________________________________________________
(область, город, район, населенный пункт)
Место работы
(учебы) ___________________________________________________________________
Номер истории болезни ___________________ Дата заболевания ________________
Дата смерти _______________________________________________________________
Клинический
диагноз ___________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
______________
___________________________________________________________________________
______________
Патолого-анатомический диагноз ____________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
______________
Вид материала _____________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Дата и время отбора материала _____________________________________________
Дата и время отправки материала ___________________________________________
Дополнительные сведения ___________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
______________
Ф.И.О. патологоанатома (судмедэксперта), направившего материал для
исследования ______________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. эпидемиолога (инфекциониста), присутствовавшего при вскрытии _______
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. лица, доставившего материал в лабораторию __________________________
Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________
НАПРАВЛЕНИЕ
В лабораторию молекулярной биологии ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ Роспотребнадзора
Направляется кровь на обнаружение РНК вируса КГЛ методом ПЦР
Ф.И.О. ____________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Возраст
___________________________________________________________________________
Домашний адрес ____________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Место работы (учебы) ______________________________________________________
___________________________________________________________________________
Дата начала заболевания ___________________________________________________
Часы и дата взятия крови __________________________________________________
Диагноз
___________________________________________________________________________
Наименование направившего учреждения ______________________________________
___________________________________________________________________________
Ф.И.О. врача ______________________________________________________________
Дата отправления материала ________________________________________________
Дата и время доставки материала в лабораторию _____________________________
___________________________________________________________________________